PCR vs PCR în timp real
PCR sau reacția în lanț a polimerazei este o descoperire revoluționată în biologia moleculară modernă, care a fost dezvoltată pentru prima dată de chimistul Kary Mullis în 1983. Permite amplificarea unei analize a unei singure secvențe dintr-un ADN complex. Ideea de bază a PCR este că doi primeri, care sunt complementari cu firele opuse ale unei secvențe de ADN, sunt orientați unul față de celălalt; primerii produc fire complementare, fiecare conținând celălalt primer. Prin urmare, rezultatul este o cantitate mare dintr-o secvență corespunzătoare ADN-ului care se află între cei doi primeri. Enzima ADN polimerază este utilizată pentru a extinde primerii în PCR. ADN polimeraza este o enzimă termostabilă și are capacitatea de a supraviețui la temperaturi ridicate (94 până la 95 ° C) utilizate pentru denaturarea ADN-ului șablon.
PCR implică trei etape, și anume, runde repetate de denaturare, recoacere a primerilor și sinteza ADN-ului. O mașină de termociclare este utilizată pentru a efectua această reacție, astfel încât să poată fi programată pentru a schimba temperaturile rapid și precis. Aplicațiile PCR sunt investigațiile penale, amprenta ADN, detectarea agenților patogeni și analiza ADN-ului speciilor umane timpurii.
Ce este PCR convențional?
Există trei etape majore ale PCR convenționale, și anume; Etapa de amplificare a ADN-ului, separarea PCR și detectarea produselor. Separarea segmentelor de ADN se face de obicei prin electroforeză pe gel de agaroză. Produsele sunt apoi colorate cu bromură de etheiduim. În cele din urmă, detectarea se realizează prin vizualizarea benzilor pe geluri sub lumină UV. Prin urmare, rezultatele finale ale PCR convenționale nu sunt exprimate ca numere. În mod normal, PCR convențional este capabil să detecteze doar un singur parametru.
Ce este PCR în timp real?
PCR în timp real poate detecta amplificarea produselor, pe măsură ce produsele sunt sintetizate. Odată cu dezvoltarea tehnologiei, PCR a devenit o tehnică foarte populară, în special pentru detectarea și identificarea bacteriilor din alimente. PCR în timp real folosește un sistem de colorare fluorescentă și un termociclator echipat cu capacitate de detectare fluorescentă.
Care este diferența dintre PCR convențional și PCR în timp real?
• PCR convențional consumă mai mult timp, deoarece folosește electroforeza pe gel pentru a analiza produsele PCR amplificate. În schimb, PCR în timp real consumă mai puțin timp, deoarece poate detecta amplificări în primele faze ale reacției.
• PCR în timp real colectează date în faza de creștere exponențială a PCR, în timp ce PCR tradițional colectează date la punctul final al reacției.
• Rezultatele punctului final al PCR convențional pot să nu fie foarte precise, dar rezultatele PCR în timp real sunt foarte precise.
• PCR în timp real este mai sensibil decât PCR convențional.
• PCR convențional are o rezoluție foarte slabă, în timp ce PCR în timp real poate detecta foarte puține modificări datorită rezoluției ridicate.
• Detectarea punctului final al PCR convențional are o gamă dinamică scurtă, în timp ce detectarea PCR în timp real are o gamă dinamică largă.
• Spre deosebire de PCR convențional, tehnicile de detectare automată se găsesc în PCR în timp real.
• PCR convențional este extrem de sofisticat și necesită mai multă forță de muncă decât PCR în timp real.
• Spre deosebire de PCR în timp real, PCR convențional nu poate face discriminări între bacteriile moarte și cele vii.
• PCR în timp real utilizează un sistem de colorare fluorescentă pentru a detecta produsele, în timp ce PCR convențional utilizează bromură de etidiu și lumină UV pentru a vizualiza benzile din mediul cu gel de agaroză.
