Diferența cheie - Benzonază vs DNază
Degradarea acizilor nucleici este importantă pentru multe tehnici de biologie moleculară. Este utilizat pe scară largă în tehnologia ADN recombinant pentru a scăpa de fragmentele nedorite de ADN și ARN. Enzimele degradante ale acidului nucleic sunt denumite nucleoză și pot fi de diferite tipuri în funcție de funcția necesară. Nucleazele care degradează ADN sunt cunoscute sub numele de DNaze, în timp ce cele care degradează ARN sunt cunoscute ca ARNaze. Aceste enzime sunt utilizate în cea mai mare parte în experimente in vitro în care se efectuează teste moleculare in vitro pentru a izola ADN pur, ARN sau proteine. Benzonazele sunt un tip de nucleaze care degradează atât ADN cât și ARN, în timp ce DNazele degradează doar ADN. Aceasta este diferența cheie între benzonază și DNază.
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferența cheie
2. Ce este benzonaza
3. Ce este DNaza
4. Asemănări între benzonază și DNază
5. Comparație cot la cot - Benzonază vs DNază în formă tabelară
6. Rezumat
Ce este Benzonaza?
Benzonaza este o endonuclează modificată genetic de la Serratia marcescens. Această enzimă este produsă la gazdele E. coli la scară industrială. Benzonaza este capabilă să scindeze ADN bicatenar, ADN liniar, ADN circular și ARN monocatenar. Astfel, benzonaza este importantă din punct de vedere comercial. Enzima benzonază este un dimer proteic care are 245 aminoacizi identici, subunități de ~ 30 kDa cu două legături disulfidice esențiale. Benzonaza clivează acizii nucleici la capătul său 5 'și are ca rezultat fragmente cu capete libere 5'. Benzonaza poate cliva acizii nucleici în orice secvență, dar preferă regiunile bogate în GC.
Benzonaza este stocată la -20 0 C. pH-ul optim pentru activitatea enzimatică este de 8,0 - 9,2. Aplicațiile benzonazei includ prepararea eșantionului pentru electroforeza pe gel proteină 2D în care benzonaza îndepărtează acizii nucleici legați și îndepărtarea contaminanților cu acid nucleic din preparatele proteice recombinante. De asemenea, este utilizat pentru a reduce vâscozitatea extractelor de proteine și pentru a preveni aglomerarea celulelor într-un amestec de celule.
Ce este DNase?
DNaza este o enzimă hidrolitică nucleazăică, care este capabilă doar să scindeze ADN bicatenar. Există două tipuri principale de DNaze: DNaza I și DNaza II. DNaza I participă la scindarea ADN-ului dublu catenar pentru a produce polinucleotide cu capete libere de 5 '. DNaza II este implicată în scindarea ADN-ului cu dublă catenă pentru a produce catene de polinucleotide cu capete libere de 3 'sau surplombe.
DNase I
DNaza I funcționează la un pH optim între 7,0 - 8,0. Activitatea enzimatică depinde de mulți cofactori ionici care includ, Ca 2+, Mg 2+ sau Mn 2+. Activitatea Mg 2+ și Mn 2+ decide funcția DNasei I. În prezența Mg 2+, DNaza I scindează fiecare catena de ADNds independent. Acest lucru are loc în mod aleatoriu. În contrast, în prezența Mn 2+, enzima clivează ambele catene de ADN în aproximativ același loc. Acest clivaj va avea ca rezultat producerea a două tipuri de fragmente de ADN; un tip cu capete contondente și un alt tip cu unul sau două surplomburi de nucleotide.
Figura 02: DNază
DNaza II
Funcțiile DNazei II la un pH optim de 4,5-5,0 și pentru activitatea sa sunt necesari ioni metalici divalenți, similar cu DNaza I. Se știe că mecanismul DNazei II constă din trei etape principale.
- În interiorul coloanei vertebrale a ADN-ului sunt induse pauze multiple de un singur fir.
- Se produc nucleotide și oligonucleotide solubile în acid.
- Deplasarea hipercromică neliniară are loc în ultima fază.
Principalii inhibitori ai enzimei DNază includ chelatori metalici, metale de tranziție și substanțe chimice, cum ar fi dodecil sulfat de sodiu și β-mercaptoetanol.
Principalele aplicații ale DNazei includ prepararea extractelor de ARN fără ADN și a extractelor de proteine și îndepărtarea ADN-ului șablon în timpul experimentelor de transcriere in vitro.
Care sunt asemănările dintre benzonază și DNază?
- Ambele sunt enzime hidrolitice.
- Ambele sunt nucleaze.
- Ambii participă prin scindarea legăturilor fosfodiesterice ale acizilor nucleici.
- Ambele necesită un pH optim și temperaturi de depozitare pentru a menține activitatea enzimei.
- Inhibitorii enzimelor includ agenți de chelare, metale de tranziție și substanțe chimice detergente.
- Aplicațiile se concentrează în principal pe obținerea extractelor de ADN, ARN și proteine de înaltă puritate.
- Ambele enzime pot fi produse prin inginerie genetică.
Care este diferența dintre benzonază și DNază?
Difuzarea articolului din mijloc înainte de tabel
Benzonază vs DNază |
|
| Benzonaza este o enzimă care este capabilă să scindeze ADN bicatenar, ADN liniar, ADN circular și ARN. | DNaza este o enzimă care este capabilă să scindeze ADN bicatenar. |
| Substrat pentru enzimă | |
| Atât ADN-ul, cât și ARN-ul sunt substraturi pentru benzonază. | ADN-ul este substratul pentru DNază. |
| Structura | |
| Intervalul optim de pH al benzonazei este de 7,0 -8,0 | Domeniile optime de pH ale DNazei I sunt 7,0 - 8,0 și DNazei II sunt 4,5 - 5,0. |
Rezumat - Benzonază vs DNază
Enzimele nucleaze sunt utilizate pe scară largă în diferite proceduri experimentale în ceea ce privește biologia moleculară și ingineria genetică. Benzonaza și DNaza sunt două tipuri de nucleaze. Benzonaza este implicată în degradarea atât a ADN-ului cât și a ARN-ului, în timp ce DNaza este implicată în scindarea ADN-ului cu dublă catenă. Aceasta este diferența de bază între benzonază și DNază. În prezent, ambele tipuri de nucleaze sunt produse prin tehnologia ADN-ului recombinant, care produce enzime de calitate superioară, care sunt optimizate pentru o producție maximă.
Descărcați versiunea PDF a Benzonase vs DNase
Puteți descărca versiunea PDF a acestui articol și o puteți folosi în scopuri offline, conform notei de citare. Vă rugăm să descărcați versiunea PDF aici Diferența dintre Benzonază și DNază
