Diferența cheie - Marker selectabil vs gen reporter
Tehnica de inginerie genetică este utilizată pentru a transfera gene importante din organism în alt organism. Inserarea unei gene străine în genomul altui organism și exprimarea acestuia în celula gazdă sunt etapele cele mai dificile în transferul genelor. Pentru a detecta succesul procesului de transformare, în molecula recombinantă se utilizează un marker selectabil și o genă reporter. Un marker selectabil este o secvență ADN sau o genă care exprimă și selectează celulele transformate din celulele netransformate. O genă reporter este o altă genă care este utilizată pentru a distinge celulele transformate și pentru a cuantifica sau detecta modul în care funcționează gena inserată în cadrul gazdei. Diferența cheie între markerul selectabil și gena reporter este că markerul selectabil este utilizat pentru a selecta celulele netransformate și pentru a semnaliza celulele transformate în timp ce gena reporter este utilizată pentru a cuantifica nivelul de expresie genică din gazdă.
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferența cheie
2. Ce este Marker selectabil
3. Ce este Reporter Gene
4. Comparație side by side - Marker selectabil vs Reporter Gene
5. Rezumat
Ce este un marker selectabil?
În ingineria genetică, gena de interes este inserată într-un vector adecvat și transformată în organisme gazdă. Cu toate acestea, transformarea are succes numai în celulele gazdă competente și există posibilitatea ca celulele gazdă să respingă absorbția ADN-ului străin. Prin urmare, diferențierea celulelor transformate și non-transformate este importantă pentru a continua cu experimentări ulterioare. Prin urmare, cercetătorii încorporează o genă marker selectabilă în vector pentru selectarea ușoară a celulelor transformate din celulele netransformate. Un marker selectabil este o secvență de ADN, în special o genă utilă în identificarea celulelor transformate. Această genă marker prezintă o trăsătură care se potrivește cu o selecție artificială de celule transformate din celule netransformate pe un suport.
Cei mai comuni markeri selectabili utilizați în biologia moleculară sunt genele rezistente la antibiotice. O genă de rezistență la antibiotice este inserată în vector și transformată în celule gazdă, în special în bacteria gazdă. Acest antibiotic special este încorporat în mediul de creștere al bacteriei. Datorită prezenței markerului selectiv, în condițiile selective, pot supraviețui numai celulele care conțin markerul selectabil adecvat. Celulele netransformate nu pot crește în mediul care conține antibiotice. Prin urmare, datorită markerului selectabil care este rezistent la antibiotice, celulele transformate sunt ușor identificate.
Genele care conferă trăsături antimetaboliților, erbicidelor sunt utilizate ca markeri selectivi în vectorii de clonare în ingineria genetică a plantelor. Cu toate acestea, această cotransformare a markerilor selectivi în organisme modificate genetic are efecte negative asupra mediului și asupra omului. Eliberarea bacteriilor rezistente la antibiotice poate crește rezistivitatea la antibiotice a agenților patogeni umani. Poate contamina produsul sau biomasa cu antibiotice și poate pierde presiunea selectivă ca urmare a degradării și inactivării antibioticelor.
Figura 01: Vector plasmidă pentru transferul genelor cu marker selectabil
Ce este un gen Reporter?
Genele reporter sunt gene care permit detectarea sau măsurarea expresiei genei inserate. Aceste gene raportoare pot fi atașate la secvențe reglatoare ale genei de interes pentru a semnaliza locația sau nivelurile expresiei. Prin urmare, în timpul exprimării genelor sub același promotor, acestea sunt transcrise într-o singură secvență ARNm și apoi traduse într-o proteină care poate indica nivelul de exprimare a genei.
Genele raportoare sunt de diferite tipuri și conțin caracteristici identificabile vizual, care sunt de obicei implicate în proteinele fluorescente și luminescente. Genele care codifică proteina fluorescentă și enzimele, convertesc substraturile invizibile în produse luminescente sau colorate, semnalând expresia genică reușită și oferind oportunitatea cuantificării expresiei genei.
Figura 02: Reporter Gene Expression
Care este diferența dintre Marker selectabil și Reporter Gene?
Difuzarea articolului din mijloc înainte de tabel
Selectabil Marker vs Reporter Gene |
|
| Markerul selectabil este un fel de secvență ADN care ajută la distingerea celulelor transformate de celulele netransformate. | Gena Reporter este o genă care ajută la cuantificarea expresiei genei dorite inserate în celula gazdă. |
| Natura unităților produse | |
| Genele sunt codificate cu caracteristici care ajută la selecția artificială pe medii de creștere. | Genele sunt codificate cu caracteristici identificabile vizual. |
| Utilizare | |
| Genele de rezistență la antibiotice, genele antimetabolite, genele de rezistență la erbicide etc. sunt exemple pentru markeri selectabili. | Codul genelor pentru proteina fluorescentă verde, β-glucuronidaza, cloramfenicol acetiltransferaza, proteina fluorescentă roșie etc. sunt exemple. |
Rezumat - Marker selectabil vs Gen Reporter
Markerii selectabili permit creșterea celulelor transformate în medii selective dozate cu un anumit antibiotic sau erbicid. Acestea sunt utilizate pentru selecția timpurie a celulelor transformate. Genele reporter sunt utilizate pentru a cuantifica nivelul de expresie al genei dorite inserate. Acestea permit, de asemenea, diferențierea celulelor transformate și non-transformate. Aceasta este diferența dintre markerul selectabil și gena reporter. Atât markerul selectabil, cât și gena reporter sunt considerați ca markeri importanți în ingineria genetică.
