Diferența cheie - Clonarea vs Subclonarea
Clonarea și subclonarea sunt proceduri biologice moleculare care creează celule sau organisme identice genetic care poartă ADN-ul sau gena care sunt de interes. Clonarea este o tehnică care implică inserarea genei sau ADN-ului interesat într-un vector, replicarea acestuia într-o bacterie gazdă și producerea de celule sau organisme care sunt copii exacte ale structurii genetice. Subclonarea este o tehnică care implică inserarea genei de interes, care este deja inserată într-un vector, într-un vector secundar, replicarea acestuia într-o bacterie gazdă și producerea de copii identice genetic ale celulelor sau organismelor. Diferența cheie între clonare și subclonare este că, în clonare, gena de interes, odată ligată într-un vector, continuă procesul de clonare în timp ce, în subclonare,gena de interes deja clonată este separată de vectorul părinte și inserată din nou într-un vector receptor și continuă procesul.
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferența cheie
2. Ce este clonarea
3. Ce este subclonarea
4. Comparație side by side - Clonarea vs subclonarea
5. Rezumat
Ce este Clonarea?
Clonarea este procedura care produce organisme sau celule identice genetic. În natură, clonarea are loc în mijloacele de reproducere asexuată. Atunci când nu există o recombinare genetică sau o modificare, celulele fiice primesc aceeași structură genetică a părintelui. Organismele procariote și eucariote creează clone prin fisiune binară, înmugurire, mitoză etc. În biologia moleculară, clonarea genelor sau a fragmentelor specifice de ADN este o metodă populară de a studia structura și funcția respectivei secțiuni ADN.
Obiectivul principal al clonării moleculare este de a face milioane de copii ale celulelor sau organismelor identice genetic care poartă fragmentul de interes ADN (în principal gene). Creează organisme cu copii genetice exacte ale altuia. În primul rând, genele specifice sunt clonate în studii moleculare pentru a obține informații structurale și funcționale și pentru secvențierea ADN-ului. De asemenea, pentru producerea de proteine sau produse specifice la scară largă, clonarea este utilizată pe scară largă.
Procedura de clonare
Pașii de bază ai procedurii de clonare sunt după cum urmează.
- Identificarea și izolarea genei de interes. (Amplificarea genei de interes prin PCR).
- Restricția digestiei genei de interes (Restricția endonuclează a tăiat gena).
- Restricția digestiei ADN-ului vector. (ADN-ul vector este, de asemenea, tăiat folosind aceeași endonuclează de restricție).
- Inserarea genei în vector și formarea moleculei recombinante.
- Transformarea vectorului recombinant într-o bacterie gazdă.
- Izolarea și identificarea bacteriilor transformate (vectorul plasmidic trebuie să conțină o genă selectabilă, cel mai frecvent o genă de rezistență la antibiotice pentru a examina bacteriile transformate).
- Expresia genei recombinante în cadrul gazdei.
Figura_01: Procedura de clonare
Ce este Subclonarea?
Subclonarea este o procedură de mutare a unei gene de interes de la un vector la alt vector pentru a vedea expresia genei pentru a obține funcționalitatea dorită a genei. În această metodă, sunt implicați doi vectori; și anume, vector părinte și vector destinație. Inserturile clonate sunt mutate din nou într-un al doilea vector în subclonare. Obiectivul transferului genei de la primul vector la al doilea vector este de a obține ceva care nu ar putea fi făcut de primul vector sau de a separa din nou o genă în fragmentul deja clonat de ADN și să o exprime singură. În această procedură sunt utilizate enzime de restricție la început.
Procedura de subclonare
Pașii de bază ai subclonării sunt după cum urmează.
- Cu ajutorul endonucleazelor de restricție, separarea ADN-ului de interes în plasmida donatorului (vectorul părinte).
- Amplificarea ADN-ului de interes folosind PCR.
- Purificarea produsului PCR (ADN de interes) prin electroforeză pe gel.
- Deschiderea plasmidei primitoare prin aceleași endonucleaze de restricție utilizate pentru a separa ADN-ul de interes în plasmida mamă.
- Ligarea ADN-ului de interes (gena) în plasmida primitoare pentru a crea plasmida subclonată.
- Transformarea vectorului subclonat într-o bacterie gazdă competentă.
- Screeningul celulelor transformate.
- Purificarea ADN-ului plasmidic și utilizarea pentru secvențierea ADN sau exprimarea genelor pentru a obține produsele dorite.
Subclonarea se efectuează cu ocazia izolării unei gene din grupul de gene clonat sau când gena de interes este necesară pentru a se transfera într-o plasmidă utilă pentru a vedea funcția exactă a genei de interes.
Figura_02: Procedura de subclonare
Care este diferența dintre Clonare și Subclonare?
Difuzarea articolului din mijloc înainte de tabel
Clonarea vs Subclonarea |
|
| Clonarea este procedura care produce organisme sau celule identice genetic. | Subclonarea este o procedură de mutare a unei gene de interes de la un vector la alt vector pentru a vedea expresia genei pentru a obține funcționalitatea dorită a genei. |
| Proces | |
| Separați ADN-ul de interes de organism și introduceți într-un vector o dată și clonați | ADN deja clonat este separat de primul vector și inserat într-un al doilea vector și clonat. |
| Introduceți mișcarea prin vectori | |
| Nu mută inserțiile (ADN de interes) de la un vector la alt vector. | Mutați inserțiile din vectorul părinte în vectorul destinație. |
Rezumat - Clonare vs Subclonare
Clonarea creează celule sau organisme identice genetic cu gena inserată sau ADN-ul de interes. Se desfășoară prin separarea și inserarea ADN-ului de interes într-un vector și expresie într-o bacterie gazdă. Subclonarea împarte pași similari cu clonarea. Cu toate acestea, în subclonare, fragmentul de ADN deja clonat (gena de interes) este inserat într-un vector și transformat într-o bacterie gazdă. Aceasta este diferența cheie între clonare și subclonare.
