Diferența cheie - Probe vs Primer
Sonda moleculară este un fragment mic de ADN sau ARN care recunoaște secvențele complementare din ADN sau ARN și permite identificarea secvenței țintă. Primer este o mică întindere de ADN sau ARN care servește ca punct de plecare pentru sinteza ADN-ului. Amorsele și sondele hibridizează cu nucleotidele complementare ale ADN-ului șablon sau ale ADN-ului țintă. Cu toate acestea, diferența cheie între sondă și primer este că primerii sunt necesari pentru replicarea ADN, în timp ce sondele sunt necesare pentru detectarea secvențelor specifice din ADN-ul probei.
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferența cheie
2. Ce este Probe
3. Ce este Primer
4. Comparație side by side - Probe vs Primer
5. Rezumat
Ce este o sondă?
Sonda este un fragment mic de ADN sau ARN utilizat pentru a detecta ADN-ul sau ARN-ul țintă din probă prin hibridizare moleculară. Ele sunt, de asemenea, cunoscute sub numele de markeri moleculari. Lungimea sondei poate varia (100 până la 1000 de baze), iar nucleotidele sondei sunt complementare părții secvenței țintă. Pentru ușurința detectării, sondele sunt marcate cu izotopi radioactivi sau cu coloranți fluorescenți sau anticorpi. Sondele se leagă de bazele complementare ale secvenței țintă și dezvăluie prezența ADN-ului sau ARN-ului țintă în probă. Există două metode principale de etichetare a sondelor: etichetarea finală și traducerea nick. Sondele sunt clasificate în diferite tipuri, inclusiv sonde ADN, sonde ARN, sonde cDNa și sonde oligonucleotidice sintetice și sunt preparate folosind diferite tehnici.
Sondele sunt instrumente importante în multe domenii microbiene și moleculare, cum ar fi virologia, patologia criminalistică, testarea paternității, amprentarea ADN-ului, detectarea bolilor genetice, RFLP, citogenetica moleculară, hibridizarea in situ etc.
Figura 01: Sonda etichetată fluorescent utilizată în FISH pentru detectarea agentului patogen
Ce este un Primer?
Primer este un fragment scurt de ADN sau ARN care servește ca inițiator pentru sinteza ADN-ului. Enzima ADN polimerază adaugă nucleotide la gruparea 3 'OH a secvenței primer și sintetizează noua catenă complementară ADN-ului șablon. Grundurile sunt fragmente foarte scurte cu lungimea de 18 până la 20 de nucleotide. Acestea sunt sintetizate chimic în laborator pentru amplificarea in vitro a ADN-ului (PCR). Grundurile pot avea orice secvență de nucleotide, deoarece sunt proiectate de utilizator. Acestea sunt sintetizate pentru a se potrivi cu bazele complementare ale șablonului ADN. Prin urmare, poate avea orice secvență de nucleotide. Grundurile sunt de cea mai mare importanță pentru replicarea ADN, deoarece ADN polimeraza nu poate sintetiza ADN nou fără o bucată preexistentă de ADN. La proiectarea primerilor pentru PCR, trebuie luate în considerare următoarele lucruri:
- Grundurile ar trebui să conțină nucleotidele complementare la capătul flancant al ADN-ului care dorește să se amplifice.
- Grundurile ar trebui să aibă o temperatură de topire între 55 - 65 0 C
- Conținutul de G și C ar trebui să fie între 50 și 60%.
Două grunduri sunt utilizate în PCR ca înainte și înapoi pentru a reproduce ambele catene ale ADN-ului probei. Grundurile sunt utilizate în mod obișnuit pentru efectuarea secvențierii PCR și ADN.
Figura 02: recoacere grund în PCR
Care este diferența dintre Probe și Primer?
Difuzarea articolului din mijloc înainte de tabel
Probe vs Primer |
|
| Sonda este un mic fragment de ADN / ARN utilizat pentru a detecta prezența secvenței țintă într-o probă prin hibridizare moleculară. | Primer este o mică întindere de ADN sau ARN care servește ca punct de plecare pentru replicarea ADN-ului. |
| Funcţie | |
| Aceasta detectează prezența unei secvențe specifice în proba de ADN sau ARN. | Aceasta acționează ca un punct de plecare pentru sinteza ADN-ului. |
| Lungime | |
| Lungimea poate fi cuprinsă între 100 - 1000 de baze | Lungimea este în general de aproximativ 18 - 20 de baze |
| Legarea cu secvență complementară | |
| Sonda hibridizează cu bazele complementare ale secvenței țintă | Primerul se recoace cu bazele complementare ale catenelor de ADN. |
| Etichetare | |
| Sondele sunt etichetate pentru a fi ușor de detectat | Grundele nu sunt în general etichetate |
| Utilizare în PCR | |
| Sondele nu sunt utilizate în PCR | Grundurile sunt utilizate în PCR |
Rezumat - Probe vs Primer
Sonda este un mic fragment de secvență de ADN sau ARN care poate fi hibridizată cu nucleotide complementare pentru a detecta o secvență țintă în probă. Sondele sunt marcate radioactiv, imunologic sau fluorescent pentru a vedea prezența secvenței țintă. Primer este un fragment de ADN sau ARN foarte mic care acționează ca punct de plecare pentru amplificarea in vitro a ADN-ului. ADN polimeraza identifică primerul grupului 3 'OH și inițiază construirea unei noi catene complementare șablonului. Sondele și primerii funcționează în mod similar prin hibridizare cu nucleotide complementare. Astfel, diferența cheie dintre sondă și primer este funcția lor principală.
