Diferența cheie - Pagina SDS vs. Pagina nativă
SDS și pagina nativă sunt două tipuri de tehnici de electroforeză pe gel de poliacrilamidă utilizate în biologia moleculară. Diferența cheie între pagina SDS și pagina nativă este tipul de gel de poliacrilamidă utilizat. În pagina SDS se folosește un gel denaturant, prin urmare, moleculele sunt separate în funcție de greutatea lor moleculară. În schimb, în Native Page, se folosesc geluri care nu denaturează. Prin urmare, moleculele sunt separate în funcție de dimensiunea, sarcina și forma lor.
Electroforeza pe gel de poliacrilamidă (Pagina) folosește un gel realizat prin polimerizarea monomerilor acrilamidici cu metilen bisacrilamidă. Poliacrilamida este mai dură și mai stabilă la căldură decât agaroză. Gelurile de poliacrilamidă au o dimensiune mai mică a porilor care permite separarea eficientă a proteinelor. Există două tipuri principale de configurări ale paginii și anume pagina SDS și pagina nativă. Pagina SDS sau electroforeza pe gel de poliacrilamidă cu sulfat de sodiu-dodecil separă proteinele pe baza greutăților lor moleculare. Gelurile denaturante sunt utilizate în pagina SDS. Native Page folosește geluri care nu denaturează și separă proteinele în funcție de dimensiunea, încărcătura și forma lor (conformație 3D).
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferența cheie
2. Ce este pagina SDS
3. Ce este pagina nativă
4. Asemănări între pagina SDS și pagina nativă
5. Comparare alăturată - Pagina SDS vs Pagina nativă în formă tabelară
6. Rezumat
Ce este pagina SDS?
Pagina SDS este cea mai comună tehnică electroforetică utilizată pentru separarea proteinelor pe baza greutății lor moleculare. Gelul se face prin adăugarea de SDS (sulfat de sodiu dodecil), care este un detergent. Proteza dentară SDS în monomeri. SDS este un detergent anionic. Prin urmare, adaugă o încărcare negativă netă proteinelor într-un interval larg de pH. Când sarcina negativă netă este transmisă moleculelor proteice, datorită variației sarcinii, structurile complexe sunt defalcate. Datorită sarcinii negative, proteinele atrag spre finalul pozitiv. Astfel, moleculele cu greutate moleculară mai mică călătoresc mai repede pe matricea gelului și pot fi observate aproape de anod, în timp ce proteinele cu greutate moleculară mai mare sunt observate mai aproape de godeuri.
Figura 01: Pagina SDS
Legarea SDS de lanțul polipeptidic este proporțională cu masa sa moleculară relativă. Prin urmare, masa moleculară poate fi determinată și prin intermediul paginii SDS. Colorarea gelurilor SDS Page se face prin colorare cu albastru de bromofenol. Aplicațiile paginii SDS variază într-o măsură mai mare, unde poate fi utilizată pentru a estima masa moleculară relativă și pentru a determina abundența relativă a proteinelor dintr-un amestec de proteine. Pagina SDS poate fi, de asemenea, utilizată pentru a determina distribuția proteinelor într-un amestec de proteine. Pagina SDS este, de asemenea, aplicată pentru purificarea și evaluarea proteinelor. Este folosit ca o procedură preliminară pentru western blot și hibridizare, care la rândul său este utilizat pentru cartografierea și identificarea proteinelor.
Ce este Native Page?
Electroforeza pe gel nativ de poliacrilamidă (Native Page) folosește un gel care nu este denaturant. Prin urmare, SDS sau orice alt agent de denaturare nu este adăugat la matricea de gel. În Native Page, separarea proteinelor se bazează pe încărcarea și dimensiunea proteinei. Prin urmare, mobilitatea proteinei depinde de încărcarea și dimensiunea proteinei.
Sarcina proteinei depinde de lanțurile laterale ale aminoacizilor. Dacă lanțurile laterale sunt încărcate negativ, proteina va primi o sarcină negativă globală și invers. Proteinele păstrează o conformație 3D datorită plierii care are loc. Împăturirea rezultă din mai multe tipuri de legături în proteine, cum ar fi legături disulfură, interacțiuni hidrofobe și legături de hidrogen. Prin urmare, dacă pagina nativă este purtată la un pH neutru, proteinele vor fi separate în funcție de forma moleculară a proteinei. Prin urmare, Native Page poate fi folosit ca o tehnică sensibilă pentru a detecta schimbarea în sarcină sau conformația proteinei.
Principalul avantaj al paginii native este că proteina utilizată pentru analiza paginii poate fi recuperată în starea inițială după analiza paginii, deoarece proteina nu este deranjată în timpul procesului. Pagina nativă este o tehnică de producție relativ mare, iar stabilitatea proteinei este crescută.
Figura 02: Pagina nativă
La finalizarea ciclului de gel, gelul Native Page poate fi vizualizat prin colorare cu albastru de bromofenol sau orice alt reactiv de colorare adecvat. Aplicațiile Native Page includ separarea proteinelor acide, inclusiv glicoproteinele, cum ar fi eritropoietina umană recombinantă sau identificarea proteinelor prezente în albumina serică bovină (BSA).
Care sunt asemănările dintre pagina SDS și pagina nativă?
- Ambele sisteme SDS Page și Native Page folosesc gelul de poliacrilamidă ca matrice a gelului.
- Ambele sunt utilizate pentru separarea și identificarea proteinelor.
- Ambele folosesc mobilitatea electroforetică pentru a separa compușii.
- Ambele pot fi realizate într-o manieră verticală sau orizontală (de cele mai multe ori realizate ca configurări de pagină verticale, deoarece lungimea de rulare este mai mare).
- Aparatul de electroforeză incluzând rezervorul de gel, piepteni, alimentarea cu energie electrică este necesară pentru funcționarea ambelor tehnici.
- Vizualizarea gelului se poate face prin metode de colorare în ambele tehnici.
Care este diferența dintre pagina SDS și pagina nativă?
Difuzarea articolului din mijloc înainte de tabel
Pagina SDS vs Pagina nativă |
|
| Pagina SDS sau Pagina de sulfat de sodiu-dodecil separă proteinele pe baza greutății lor moleculare și folosește un gel denaturant. | Native Page folosește geluri care nu denaturează și separă proteinele în funcție de dimensiunea, încărcătura și forma lor (conformație 3D). |
| Tipul de gel | |
| Un gel denaturant este utilizat în pagina SDS. | Un gel care nu este denaturant este utilizat în pagina nativă. |
| Prezența SDS | |
| SDS este prezent ca detergent pentru a transmite o încărcare negativă pe eșantion în pagina SDS. | SDS nu este prezent în pagina nativă. |
| Bază de separare | |
| Separarea proteinelor depinde de greutatea moleculară a proteinei din pagina SDS. | Separarea depinde de dimensiunea și forma moleculei de proteine din pagina nativă. |
| Stabilitatea proteinei | |
| Stabilitatea proteinei este scăzută în pagina SDS. | Stabilitatea proteinelor este ridicată în pagina nativă. |
| Recuperarea proteinei originale | |
| Nu este posibil, deoarece este denaturat în pagina SDS. | Posibil pe pagina nativă. |
Rezumat - Pagina SDS vs Pagina nativă
SDS Page și Native Page sunt două tipuri de tehnici de electroforeză pe gel de poliacrilamidă utilizate pentru separarea proteinelor. Pagina SDS este tratată cu un detergent numit SDS. SDS conferă proteinei o sarcină negativă globală, care are ca rezultat denaturarea proteinei. Prin urmare, proteinele sunt separate pe baza greutății lor moleculare. În schimb, tehnica Native Page nu folosește niciun agent de denaturare. Astfel proteinele sunt fie separate în funcție de mărimea lor, fie de formă. Aceasta este diferența dintre pagina SDS și pagina nativă.
