Diferența cheie - Pagina SDS vs Western Blot
Western blot este o tehnică care detectează o proteină specifică dintr-o probă de proteine. Această tehnică este realizată prin mai mulți pași cheie: electroforeză pe gel, ștergere și hibridizare. Electroforeza pe gel de poliacrilamidă cu dodecil sulfat de sodiu (pagina SDS) este un fel de tehnică de electroforeză pe gel care este utilizată pentru separarea proteinelor în funcție de dimensiunile lor (greutăți moleculare). Western blot este o foaie specială a unei membrane de blotare care este utilizată pentru a transfera același model al proteinelor din pagina SDS. Diferența cheie între SDS Page și western blot este că SDS Page permite separarea proteinelor dintr-un amestec, în timp ce western blot permite detectarea și cuantificarea unei proteine specifice dintr-un amestec. Ambele sunt utile în studiile de analiză a proteinelor.
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferența cheie
2. Ce este pagina SDS
3. Ce este Western Blot
4. Comparare side by side - Pagina SDS vs Western Blot
5. Rezumat
Ce este pagina SDS?
SDS Page este o tehnică de electroforeză pe gel utilizată pentru separarea proteinelor. Este frecvent utilizat în biochimie, genetică, criminalistică și biologie moleculară. Odată ce proteinele sunt extrase din probă, acestea sunt rulate pe un gel format din SDS și poliacrilamidă. SDS este un detergent anionic care este utilizat pentru liniarizarea proteinelor (proteine denaturate) și pentru a conferi o sarcină negativă proteinelor liniarizate proporțională cu masa lor moleculară. Poliacrilamida devine suportul solid al gelului. Proteinele denaturate care sunt încărcate negativ migrează spre capătul pozitiv al aparatului prin gel. În funcție de dimensiunile proteinelor, viteza de migrare diferă în funcție de proteine și are loc separarea. Prin urmare, pagina SDS este utilă pentru separarea proteinelor individuale pe baza dimensiunilor acestora.
Pregătirea gelului de poliacrilamidă pentru fracționarea proteinelor este un pas crucial în pagina SDS. Concentrația corectă de poliacrilamidă și tipul de agent de reticulare utilizat afectează puternic proprietățile fizice ale gelului, ceea ce face separarea efectivă a diferitelor proteine. Dimensiunile porilor gelului trebuie gestionate corespunzător pentru o separare eficientă. Cu toate acestea, pagina SDS este considerată o tehnică de separare a proteinelor de înaltă rezoluție.
Tehnica SDS Page are o limitare majoră în analiza proteinelor. Deoarece SDS denaturează proteinele înainte de separare, nu permite detectarea activității enzimatice, a interacțiunilor de legare a proteinelor, a cofactorilor de proteine etc.
Figura 01: Pagina SDS
Ce este Western Blot?
Tehnica Western blot permite detectarea unei proteine specifice dintr-un amestec de proteine și măsurarea cantității și greutății moleculare a proteinei. Western blot este membrana utilizată în timpul procedurii de blotare pentru a obține imaginea în oglindă a modelelor de proteine din gelul de poliacrilamidă SDS. Membrana care este utilizată pentru Western Blot este alcătuită în principal din nitroceluloză sau difluorură de poliviniliden (PVDF). Membrana cu proteina transferată poate fi utilizată pentru a identifica proteina dorită. Este nevoie de anticorp de înaltă calitate pentru detectarea proteinei dorite prin hibridizare. Anticorpul se leagă de antigenul său specific și dezvăluie prezența antigenului dorit, care este o proteină.
Transferul proteinelor din gelul de poliacrilamidă SDS în western blot se realizează prin electroblotare. Este o metodă eficientă și rapidă care face ca proteinele să se elibereze din gel și să treacă pe membrana nitrocelulozei (western blot).
Figura 02: Western Blot
Care este diferența dintre SDS Page și Western Blot?
Difuzarea articolului din mijloc înainte de tabel
Pagina SDS vs Western Blot |
|
| Pagina SDS este o tehnică de electroforeză pe gel. | Western blot este o tehnică care se efectuează pe o membrană pentru a detecta o proteină specifică dintr-un amestec. |
| Utilizare | |
| Pagina SDS permite separarea proteinelor în funcție de dimensiunile acestora. | Western blot permite transferul de proteine pe gelul paginii SDS fără a-și schimba modelul și permite hibridizarea cu anticorpi specifici. |
| Dezavantaje | |
| Denaturarea proteinelor, costul ridicat și prezența substanțelor chimice ale neurotoxinelor sunt dezavantajele acestei tehnici. | Această tehnică consumă mult timp și necesită o bună experiență personală și condiții controlate specifice. |
Rezumat - Pagina SDS vs Western Blot
Pagina SDS și western blot sunt două metode implicate în analiza proteinelor. Pagina SDS permite separarea ușoară a proteinelor pe un gel în funcție de greutatea lor moleculară. Western blot ajută la confirmarea prezenței și cantității unei proteine specifice prin hibridizare cu anticorpi specifici. Aceasta este diferența dintre SDS Page și western blot.
