Diferența cheie - electroforeza capilară vs electroforeza pe gel
Electroforeza este o tehnică care este utilizată pentru a separa biomoleculele pe baza sarcinii particulelor, a dimensiunii particulelor și a formei particulelor. Migrația moleculei, cunoscută sub numele de mobilitate electroforetică, depinde de tipul de polimer / gel utilizat, mărimea porilor, tensiunea furnizată, timpul de funcționare și raportul suprafață / volum. Există diferite tipuri de tehnici de electroforeză bazate pe tipul de biomoleculă utilizat. Primul tip de electroforeză inventat a fost electroforeza hârtiei în care s-a folosit o hârtie cu nitroceluloză ca mediu pentru separarea biomoleculelor. Principiul electroforezei pe gel în care s-au folosit geluri de dimensiuni diferite ale porilor pentru separarea biomoleculelor, a fost inventat mai târziu. Tehnica de electroforeză pe gel a fost modificată în continuare pentru a îmbunătăți acuratețea tehnicii și o astfel de modificare este electroforeza capilară. Diferența cheie între electroforeza capilară și electroforeza pe gel este că electroforeza pe gel se realizează într-un plan vertical sau orizontal folosind un gel polimeric cu dimensiunea standard a porilor, în timp ce electroforeza capilară se realizează într-un tub capilar cu un polimer lichid sau un gel.
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferența cheie
2. Ce este electroforeza pe gel
3. Ce este electroforeza capilară
4. Asemănări între electroforeza capilară și electroforeza pe gel
5. Comparație side by side - Electroforeza capilară vs electroforeza pe gel în formă tabelară
6. Rezumat
Ce este electroforeza pe gel?
Electroforeza pe gel este o tehnică utilizată pentru a separa în principal acizii nucleici, proteinele sau aminoacizii pe baza sarcinii, dimensiunii și formei sale. Această tehnică folosește un gel fizic, care este o substanță polimerică, ca mediu de separare. Gelurile utilizate cel mai frecvent sunt Agaroză (pentru separarea acidului nucleic) și Poliacrilamidă (pentru separarea proteinelor). Aparatul electroforetic cu gel conține tava de turnare a gelului pentru a pregăti gelul, piepteni de turnare pentru a pregăti godeurile, rezervorul tampon, electrozi - pozitivi (anod) și negativi (catod) și unitatea de alimentare cu tensiune. Moleculele precum ADN sau ARN, care sunt încărcate negativ, se deplasează de la catod la anod și moleculele care sunt încărcate pozitiv se mișcă invers. Prepararea gelului se face conform cerințelor. Dacă este necesară o rezoluție înaltă sau separarea moleculelor,trebuie preparat un gel cu concentrație ridicată, cu o dimensiune mai mică a porilor. Moleculele separate pe matricea de gel sunt observate după o tehnică de colorare. Moleculele separate apar ca benzi pe matricea gelului.
Figura 01: Electroforeza pe gel
Electroforeza pe gel este utilizată în diagnosticarea moleculară, cum ar fi amprentarea ADN-ului pentru a determina prezența unui anumit fragment ADN / ARN sau a unei proteine. Electroforeza pe gel determină, de asemenea, puritatea probei de biomoleculă extrasă. Electroforeza pe gel se realizează ca etapă preliminară pentru in și hibridizare și ca analiză de confirmare după secvențiere.
Ce este electroforeza capilară?
Electroforeza capilară este o modificare a electroforezei pe gel care folosește același principiu de separare bazat pe sarcină, dimensiunea moleculei, dar care se realizează într-un tub capilar fie cu o substanță de gel, fie cu un polimer lichid. Capilarele sunt preparate din siliciu topit, iar fiecare tub capilar are un diametru intern de 50-100μm și are o lungime de 25-100cm. Probele sunt injectate în tubul capilar care conține materialul polimeric și sunt separate mult mai rapid decât electroforeza convențională pe gel. Sistemul capilar este bine protejat în interiorul unui înveliș izolator care protejează proba de orice contaminare. Capilarele pot fi umplute cu polimeri lichizi, cum ar fi hidroxietil celuloză sau geluri de înaltă rezoluție, cum ar fi poliacrilamida. Electroforeza capilară oferă o rezoluție mai mare; prin urmare, separarea este mai precisă. Electroforeza capilară utilizează un sistem automat de detectare prin analiză spectrofotometrică. Acest lucru se datorează raportului mai mare dintre suprafață și volum.
Figura 02: Electroforeză capilară
Electroforeza capilară este utilizată în situații precum criminalistica în care este necesară o precizie mai mare și nu este frecvent utilizată, deoarece este o tehnică costisitoare.
Care sunt asemănările dintre electroforeza capilară și electroforeza pe gel?
- Separarea moleculelor în ambele tehnici se bazează pe sarcina și dimensiunea moleculei.
- Ambele tehnici pot fi utilizate pentru a separa atât acizii nucleici, cât și proteinele.
- Volumul eșantionului celor două tehnici este același.
- Ambele tehnici folosesc un tampon pentru a facilita separarea.
Care este diferența dintre electroforeza capilară și electroforeza pe gel?
Difuzarea articolului din mijloc înainte de tabel
Electroforeza capilară vs Electroforeza pe gel |
|
| Electroforeza capilară este o tehnică care separă biomoleculele pe un tub capilar folosind un mediu polimeric lichid sau gel. | Electroforeza pe gel este o tehnică care separă biomoleculele pe un plan vertical sau orizontal folosind un mediu de gel polimeric. |
| Separare | |
| În electroforeza capilară, separarea se face în interiorul unui tub capilar. | În electroforeza pe gel, separarea se face pe un plan vertical sau orizontal. |
| Mediu de separare | |
| Polimerii lichizi precum hidroxietilceluloza sunt folosiți în electroforeza capilară. | Gelurile, fie agaroză, fie poliacrilamidă, sunt utilizate ca mediu în electroforeza pe gel. |
| Cross Linkage | |
| Rezoluția înaltă poate fi obținută din electroforeza capilară. | Rezoluția este scăzută în electroforeza pe gel. |
| Raport suprafață / volum | |
| Raportul suprafață / volum este ridicat în electroforeza capilară. | Raportul suprafață / volum este scăzut în electroforeză pe gel. |
| Tehnica de detectare | |
| Detectarea se face prin detectoare automate spectrofotometrice în electroforeză capilară. | Colorarea și observarea prin transiluminator UV se fac ca tehnici de detectare în electroforeza pe gel. |
Rezumat - Electroforeza capilară vs electroforeza pe gel
Diagnosticul molecular joacă un rol major în lumea științifică. Identificarea și purificarea ADN-ului, ARN-ului și proteinelor sunt etape critice în procedurile de diagnostic. Electroforeza este o tehnică care separă și identifică biomoleculele atât în electroforeza pe gel, cât și în electroforeza pe gel capilar mult avansat. Electroforeza pe gel se realizează într-un plan vertical sau orizontal folosind un gel polimeric de dimensiune standard a porilor, în timp ce electroforeza capilară se realizează într-un tub capilar cu un lichid polimeric sau un gel. Aceasta este diferența dintre electroforeza capilară și electroforeza pe gel. La finalizarea tehnicii de electroforeză, biomoleculele sunt procesate în continuare pentru a obține informații de nivel superior prin hibridizare sau prin tehnici precum amprentarea digitală.
Descărcați versiunea PDF a electroforezei capilare vs electroforeza pe gel
Puteți descărca versiunea PDF a acestui articol și o puteți folosi în scopuri offline, conform notei de citare. Vă rugăm să descărcați versiunea PDF aici Diferența dintre electroforeza pe gel și electroforeza capilară.
