Diferența cheie - ELISA directă vs indirectă
Un test imunoenzimatic legat de enzime (ELISA), cunoscut și sub numele de test imunoenzimatic enzimatic, este un test serologic care detectează anticorpi din sânge. Este folosit ca instrument de diagnosticare pentru a afla dacă pacientul a fost expus unui anumit tip de virus sau la un alt agent infecțios (antigen) și dacă organismul a produs anticorpi împotriva infecției. ELISA poate identifica, de asemenea, infecțiile trecute și actuale. Prin urmare, ELISA este adesea folosit ca un test de screening de către medici înainte de o analiză aprofundată a bolilor. Acest test poate fi efectuat în laborator prin prelevarea unei probe de sânge de la pacient. Există două tipuri de test ELISA: ELISA direct și ELISA indirect. Diferența cheie între ELISA directă și indirectă este că ELISA indirectă este mai sensibilă și necesită adăugarea unui anticorp secundar, în timp ce ELISA directă este mai puțin sensibilă și folosește doar un anticorp primar.
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferența cheie
2. Ce este ELISA directă
3. Ce este ELISA indirectă
4. Comparație side by side - ELISA directă vs indirectă
5. Rezumat
Ce este ELISA Direct?
ELISA este un test de diagnostic al bolii efectuat pentru a identifica prezența anumitor antigeni sau anticorpi în sânge. Se face ca test de placă. Folosește anticorpi legați de enzime ușor de testat. Prezența antigenilor în proba de ser se leagă de anticorpi specifici legați de enzime. În etapa finală, se adaugă un substrat specific pentru a reacționa cu enzima. Enzima convertește substratul într-un produs colorat sau care produce semnal. Schimbarea culorii în substratul chimic relevă prezența unui anumit anticorp în proba de ser. Testul ELISA direct utilizează doar un anticorp primar legat de enzimă. La legarea de antigen, acesta schimbă rapid culoarea, indicând prezența agentului infecțios în sânge. In orice caz,intensitatea semnalelor este mai slabă în ELISA directă, deoarece epitopii sunt limitați la legarea antigenilor. Prin urmare, ELISA directă este mai puțin sensibilă în comparație cu ELISA indirectă.
Figura 01: Test ELISA direct
Ce este ELISA indirect?
ELISA poate fi efectuat folosind două tipuri de anticorpi și anume; anticorp primar și anticorp secundar. Instrumentul ELISA indirect utilizează ambele tipuri de anticorpi pentru a amplifica semnalele pentru o mai bună detectare. Tehnica ELISA indirectă se realizează după cum urmează.
- Plăcile sunt incubate cu antigeni și spălate pentru a bloca legarea nespecifică.
- Apoi se adaugă anticorpi primari și se spală.
- Se adaugă și se spală anticorpul secundar legat de enzime.
- Se adaugă un substrat și se lasă să reacționeze cu enzimele.
- Semnalele sunt detectate și se identifică prezența sau absența antigenului specific în probă.
În testul ELISA indirect, mai mulți anticorpi secundari se pot lega de un singur anticorp primar. Anticorpii secundari sunt legați de enzime ușor de testat. Prin urmare, o legare poate face un semnal puternic datorită mai multor interacțiuni. Prin urmare, ELISA indirectă este mai sensibilă decât ELISA directă. Cu toate acestea, ELISA indirectă poate produce semnale nespecifice datorită reacțiilor încrucișate ale anticorpilor secundari.
Figura 02: Test ELISA indirect
Care este diferența dintre ELISA directă și indirectă?
Difuzarea articolului din mijloc înainte de tabel
ELISA directă vs indirectă |
|
| ELISA directă este mai puțin sensibilă în comparație cu ELISA indirectă. | ELISA indirectă este mai sensibilă. |
| Timp luat | |
| Testul ELISA direct este un proces rapid. | ELISA indirectă consumă mult timp. |
| Utilizarea anticorpilor | |
| În ELISA direct se utilizează un singur tip de anticorpi (anticorpi primari). | Anticorpii primari și secundari sunt utilizați pentru ELISA indirectă. |
| Legătură cu enzime | |
| Anticorpii primari sunt legați de enzime. | Anticorpii secundari sunt legați de enzime. |
| Reactivitatea încrucișată a celui de-al doilea anticorp | |
| ELISA direct elimină reactivitatea încrucișată a celui de-al doilea anticorp. | ELISA indirectă este afectată de reactivitatea încrucișată a celui de-al doilea anticorp. |
| Semnale | |
| Semnalele sunt slabe în comparație cu ELISA indirectă. | Semnalele sunt amplificate în ELISA indirectă. Prin urmare, este ușor de detectat. |
Rezumat - ELISA directă vs indirectă
ELISA este o tehnică biochimică utilizată în principal în imunologie pentru a detecta prezența unui anticorp sau a unui antigen într-o probă de sânge a unui pacient. Poate fi realizat prin două procese cunoscute sub numele de ELISA directă sau indirectă. Testul ELISA direct utilizează numai anticorpi primari pentru a detecta antigenul, în timp ce ELISA indirect utilizează atât anticorpi primari, cât și secundari. În ELISA directă, anticorpii primari sunt marcați, în timp ce în ELISA indirectă, anticorpii secundari sunt marcați. Aceasta este diferența dintre ELISA directă și indirectă.
