Diferența cheie - ADNc vs Biblioteca Genomică
Există două tipuri majore de biblioteci ADN construite de oamenii de știință folosind tehnici de inginerie genetică. Acestea sunt biblioteca ADNc și biblioteca Genomică. Diferența cheie între ADNc și biblioteca genomică este că biblioteca ADNc conține ADN-ul complementar clonat al ARNm total al unui organism, în timp ce biblioteca ADN genomic conține fragmentele clonate ale întregului genom al unui organism. Biblioteca ADN genomic este mai mare decât biblioteca ADNc.
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferența cheie
2. Ce este Biblioteca ADNc
3. Ce este Biblioteca Genomică
4. Comparare Side by Side - ADNc vs Biblioteca Genomică
5. Rezumat
Ce este o bibliotecă genomică?
O bibliotecă de ADN genomic este o colecție de clone care poartă fragmente de ADN genomic total al unui organism. Conține întreg ADN-ul genomic al acelui organism, inclusiv secvențe de codificare și necodificare. Construcția unei biblioteci genomice se realizează prin tehnologia ADN-ului recombinant urmată de clonare (inginerie genetică). Există diferite etape implicate în construcție, așa cum se arată în figura 01. Procesul începe cu izolarea ADN genomic. Folosind un protocol adecvat de extracție a ADN-ului, ADN-ul genomic total al unui organism trebuie izolat. Apoi, ADN-ul ar trebui transformat în dimensiuni ușoare sau în fragmente specifice prin endonucleaze de restricție (enzime de tăiere a ADN-ului). ADN-ul fragmentat trebuie introdus în vectori folosind ligazele ADN (enzime de alăturare a ADN-ului). Un vector este un organism auto-replicant. Plasmidele și bacteriofagii sunt vectori frecvent utilizați în tehnologia ADN-ului recombinant. Acești vectori legați sunt cunoscuți ca molecule de ADN recombinant, deoarece poartă atât secvențe de ADN proprii cât și inserate. Vectorii recombinați sunt adăugați la o bacterie gazdă și sunt făcuți pentru a prelua vectorii recombinați din interiorul celulei bacteriene. Bacteriile cu vectori recombinați (plasmide) ar trebui cultivate într-un mediu de cultură. În timpul multiplicării bacteriene, ADN-ul bacterian, împreună cu plasmidele recombinante, își reproduc genomul și produce clone. Aceste clone conțin întregul genom al organismului sursă. Prin urmare, se numește bibliotecă genomică. Plasmidele pot fi ușor separate de ADN-ul cromozomial bacterian pentru a construi biblioteca genomică a acelui organism. Dacă un anumit organism conține gene interesate,este ușor de detectat în biblioteca genomică prin hibridizare folosind sonde moleculare (markeri).
Bibliotecile genomice sunt importante pentru a studia structura și funcția genomică, gene specifice, localizarea genelor, cartografierea genelor, mutații, secvențierea genelor, identificarea unor gene terapeutice noi etc.
Figura_1: Construirea unei biblioteci genomice
Ce este o bibliotecă ADNc?
O bibliotecă de ADNc este o colecție de clone ADN complementare (ADNc) sintetizate din ARNm total al unui organism. Procedura de construcție implică pași diferiți. Purificarea ARNm total dintr-un organism este primul pas implicat. ARNm izolat este convertit în fire ADNc printr-un proces numit transcripție inversă. Transcrierea inversă este facilitată de o enzimă numită transcriptază inversă. Acesta folosește un primer 3 'mic și inițiază sinteza primei catene de ADNc complementare a catenei de ARNm șablon. ADNc dublu catenar rezultat este transformat în fragmente mai mici folosind endonucleaze de restricție și inserate în vectori adecvați. Aceste molecule recombinate construite sunt apoi adăugate într-un organism gazdă și crescute într-un mediu de cultură pentru a produce clone. Colecția de clone care conțin fragmente de ADNc ale unui organism este cunoscută sub numele de bibliotecă de ADNc. ARNm matur complet tăiat nu conține introni și regiuni de reglare. Prin urmare, fragmentele necodificate nu sunt prezente în bibliotecile de ADNc, spre deosebire de o bibliotecă genomică.
Bibliotecile ADNc sunt importante pentru analiza regiunilor de codificare, a funcțiilor genetice, a expresiei genelor etc.
Figura_2: Construirea unei biblioteci ADNc
Care este diferența dintre ADNc și Biblioteca Genomică?
Difuzarea articolului din mijloc înainte de tabel
ADNc vs Biblioteca Genomică |
|
| Biblioteca ADNc este o colecție de clone care poartă ADN-ul complementar la ARNm al unui organism | Biblioteca genomică este o colecție de clone care poartă ADN-ul genomic total al unui organism. |
| Codificare vs Secvențe necodificate | |
| biblioteca ADNc conține doar secvențele de codare; nu conține introni. | Biblioteca genomică este formată din întregul ADN genomic, inclusiv ADN necodificat (introni și reglator). |
| mărimea | |
| Biblioteca ADNc este mică. | Biblioteca genomică este mare. |
| Materie prima | |
| Materia primă este ARNm | Materia primă este ADN-ul. |
| Implicarea transcrierii inverse. | |
| Transcrierea inversă se întâmplă în prima sinteză a catenelor ADNc. | Transcrierea inversă nu se întâmplă. |
Rezumat - ADNc și Biblioteca Genomică
Biblioteca genomică reprezintă o populație de clone care poartă ADN-ul genomic total fragmentat al unui organism. Biblioteca ADNc reprezintă populația de clone care poartă ADN complementar al ARNm total al unui organism. O clonă ADNc conține doar secvențele găsite în ARNm, în timp ce clona genomică conține secvențele întregului genom. Aceasta este diferența dintre ADNc și biblioteca genomică.
