Diferența cheie - Tripsinizare caldă vs rece
Tripsinizarea la cald și la rece sunt două metode utilizate în dezagregarea enzimatică a celulelor în cultura celulelor animale. Diferența cheie între tripsinizarea caldă și rece, așa cum sugerează numele, depinde de temperatura la care se adaugă tripsina pentru dezagregarea celulară. Tripsinizarea caldă are loc în condiții de temperatură mai ridicată (36,5 - 37 0 C), în timp ce tripsinizarea rece are loc în condiții de temperatură scăzută.
În timpul procesului de cultivare a celulelor primare a celulelor animale, există trei metode principale utilizate și s-au dovedit a fi de succes. Cele trei metode includ dezagregarea mecanică a celulelor, dezagregarea enzimatică a celulelor și tehnica explantului primar. Dezagregarea enzimatică a celulelor duce la izolarea celulelor și se face de către enzima tripsină degradatoare de proteine. Prin urmare, acest proces este cunoscut sub numele de Tripsinizare. Tripsinizarea se poate face în două condiții diferite și anume Tripsinizarea caldă și Tripsinizarea rece. Tripsinizarea caldă este metoda de tratare a celulelor cu tripsină în condiții calde la o temperatură de 36,5 - 37 0C. Tripsinizarea la rece este procesul de tratament cu tripsină care are loc în condiții mai reci, de preferință în gheață menținând temperaturi foarte scăzute.
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferența cheie
2. Ce este Tripinizarea caldă
3. Ce este Tripinizarea la rece
4. Asemănări între Tripinizarea la cald și la rece
5. Comparație alăturată - Tripinizare caldă vs rece sub formă de tabel
6. Rezumat
Ce este Tripinizarea caldă?
Tripsinizarea se poate face pentru a dezagrega componentele celulare pentru a izola celulele pentru a produce o cultură celulară primară. Tripsina este o enzimă de degradare a proteinelor, iar amestecul enzimatic utilizat în tripsinizare poate fi fie un extract brut, fie un produs purificat. Se spune că extractul brut este mai eficient în liza proteinelor și dezintegrarea celulelor, deoarece conține alte enzime degradante.
Tripsinizarea caldă este cea mai frecvent utilizată metodă enzimatică pentru dezagregarea celulară care are loc în condiții de temperatură mai ridicată. Înainte de tratamentul prin tripsinizare, țesutul dorit este tăiat în bucăți mai mici. Facilitează procesul ușor de dezagregare. Țesutul tăiat este apoi spălat într-un mediu special cunoscut sub numele de mediu de sare bazală de disecție.
La finalizarea etapei de spălare, celulele sunt transformate într-un balon care conține enzima activă, care este tripsina. Deoarece această tehnică implică un protocol cald de tripsinizare, tripsina este plasată la o temperatură de aproximativ 37 0 C timp de aproximativ patru ore.
Figura 01: Tripsină
Conținutul este amestecat și agitat prin utilizarea metodelor de centrifugare pentru ușurarea protocolului și pentru a accelera procesul de dezagregare. Odată ce timpul recomandat este atins, celulele pot fi derivate din supernatant. Celulele derivate din supernatant sunt apoi incubate la o anumită temperatură și timp.
Ce este Tripsinizarea la rece?
Tripsinizarea la rece este celălalt tip de tripsinizare care are loc în condiții de frig. În această tehnică, celulele care sunt tocate și spălate sunt plasate în flacoane pe gheață și apoi înmuiate cu tripsină. Perioada de înmuiere este mult mai lungă - aproximativ 6 - 24 de ore.
După finalizarea procedurii de înmuiere, tripsina este îndepărtată din lizatul celular și bucățile de țesut sunt incubate în continuare la 37 0 C timp de aproximativ 20 - 30 de minute. Dezagregarea celulelor este determinată de pipetarea repetată a amestecului tisular. Acest lucru va permite celulelor să se disocieze de membrană și să ajungă la supernatant. Odată ce celulele se află în supernatant, acestea sunt incubate și crescute la temperatura și perioada de timp dorite.
Metoda de tripsinizare rece are mai multe avantaje
- Randament mai mare de celule viabile, deoarece deteriorarea celulei este minimizată. Deteriorarea celulei este redusă la minimum prin utilizarea etapelor de centrifugare.
- Metoda foarte convenabilă.
- Mai puțin laborios.
Principala limitare a metodei de tripsinizare la rece este că cantitățile mari nu pot fi utilizate într-o singură instanță.
Care sunt asemănările dintre Tripsinizare caldă și rece?
- Atât procesele de tripsinizare la cald, cât și la rece folosesc enzima tripsină pentru dezagregarea celulelor.
- Atât procesele de tripsinizare la cald, cât și la rece sunt utilizate în procedurile de cultură celulară pentru dezagregarea celulelor.
- Atât în procedurile de tratament cu Tripsinizare la cald, cât și la rece, celulele sunt derivate din supernatant.
Care este diferența dintre Tripinizare caldă și rece?
Difuzarea articolului din mijloc înainte de tabel
Tripsinizare caldă vs rece |
|
| Tripsinizarea caldă este metoda de tratare a celulelor cu tripsină în condiții calde la o temperatură de 36,5 - 37 0. | Tripsinizarea la rece este procesul de tratament cu tripsină care are loc în condiții mai reci, de preferință în gheață menținând temperaturi foarte scăzute. |
| Protocol | |
| Bucățile de țesut tocate sunt menținute la 37 0 C continuu pe tot parcursul procedurii. | Bucățile de țesut tocate sunt menținute inițial la temperaturi răcite cu gheață și apoi menținute la 37 0. |
| Temperatura | |
| Tripsinizarea caldă are loc la 36,5 - 37 0 | Tripsinizarea la rece are loc la temperaturi scăzute de gheață. |
| Timp consumat | |
| Timp mai mic necesar pentru întregul proces (aproximativ 4 ore) de tripsinizare caldă. | Timp mai lung necesar (aproximativ 6 - 24 de ore) pentru tripsinizarea la rece. |
| Randament de celule viabile | |
| Scăzut în tripsinizare caldă. | Bogat în tripsinizare rece. |
| Utilizarea centrifugării | |
| Centrifugarea este necesară pentru dezagregarea celulelor în tripsinizare caldă. | Centrifugarea nu este necesară în tripsinizarea la rece. |
| Cantitatea inițială de țesuturi pentru tripsinizare | |
| O cantitate mai mare de țesut poate fi utilizată în tripsinizarea caldă. | O cantitate mai mică de țesut poate fi utilizată în tripsinizarea rece. |
| Deteriorarea celulei | |
| Mare datorită centrifugării în tripsinizare caldă. | Mai puțin din cauza tripsinizării la rece. |
Rezumat - Tripsinizare caldă vs rece
Tripsinizarea este metoda de utilizare a enzimei tripsină degradatoare de proteine pentru dezagregarea și prepararea culturilor de celule primare în timpul procesului de cultivare a celulelor. Există două tehnici principale de tripsinizare bazate pe temperaturile utilizate în timpul procedurii. Sunt tripinizare caldă și rece. Tripsinizarea caldă se realizează la 37 0 C, în timp ce tripsinizarea la rece se efectuează în condiții de răcire cu gheață. Deși tripsinizarea la rece durează mai mult timp pentru finalizare, se spune că are un randament mai mare de celule viabile. Acest lucru se datorează faptului că daunele celulare sunt reduse la minimum prin tripsinizare la rece, deoarece nu utilizează etape de centrifugare viguroase. Aceasta este diferența dintre tripsinizarea caldă și cea rece.
