Diferența cheie - ADN ligaza T4 vs T7
ADN ligaza este o enzimă importantă utilizată în tehnicile de biologie moleculară. Funcționează ca un adeziv molecular pentru a uni nucleotidele formând legături fosfodiesterice între nucleotide. Legăturile fosfodiester sunt formate între capătul 3 'hidroxil al fragmentului de zahăr și gruparea fosfat 5'. ADN ligaza este vitală în procesul de replicare pentru a se alătura fragmentelor Okazaki ale catenei rămase și în timpul mecanismelor de reparare a ADN și a experimentelor de clonare in vitro pentru a se alătura genei dorite de interes la genomul vector. Există două ligase ADN principale utilizate în prezent de biologii moleculari: ligasele ADN T4 și T7. ADN ligaza T4 este una dintre primele enzime izolate de bacteriofagul T4. ADN ligaza T7, care este o proteină mai mică, este o enzimă izolată din bacteriofagul T7. Aceasta este diferența cheie între ligasele ADN T4 și T7.
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferența cheie
2. Care este acțiunea ADN ligazei
3. Ce este ADN ligaza T4
4. Ce este ADN ligaza T7
4. Asemănări între ADN ligaza T4 și T7
5. Comparație side by side - T4 vs ADN ligaza T7 în formă tabelară
6. Rezumat
Care este acțiunea ADN ligazei?
Ligarea ADN-ului are loc într-o reacție în trei etape. Primul pas este un atac nucleofil asupra alfa-fosforului ATP generând o enzimă covalentă-adenilat intermediar în care AMP este legat de azotul terminal al lanțului lateral al lizinei. În a doua etapă, are loc un atac nucleofil asupra fosforului enzimei-adenilat de către substratul ADN terminat cu 5'-fosfat, eliberând lizină și formând ADenilat de ADN. În etapa finală, ADenilatul de ADN este atacat de 3'-OH al unei alte catene de ADN, eliberând AMP și alăturându-se polinucleotidelor.
Ce este ADN Ligaza T4?
Ligaza T4 a fost prima ligază izolată și identificată de Meselson, Weigle și Kellenberger și a fost prima ligază comercială produsă vreodată. ADN ligaza T4 este o enzimă dependentă de ATP care catalizează formarea legăturii fosfodiesterice. Este un lanț polipeptidic unic cu 487 de resturi de aminoacizi și are o greutate moleculară de aproximativ 77 kDa. PH-ul optim pentru activitatea sa se situează în intervalul 7,5 - 8.
Figura 01: ADN ligaza T4
ADN Ligaza T4, așa cum sugerează și numele său, este prezentă în bacteriofagul T4 și a fost izolată când fagul a produs enzima la infecția cu E. coli. Enzima ligează duplexuri de ADN dublu catenar cu capete contondente, iar fragmentele care urmează să fie legate ar trebui să fie foarte apropiate unele de altele.
Ce este ADN ligaza T7?
T7 ligaza este 41 kDa proteină produsă de bacteriofagul T7 și este izolată prin infectarea celulelor E. coli. Funcția principală a ligazei T7 este de a lega duplexurile ADN prin legături fosfodiesterice și de a uni fragmente din ADN din apropiere în timpul experimentelor de clonare. PH-ul optim pentru ADN ligaza T7 se situează în intervalul 7,0 - 7,2. Ligaza T7 este dependentă de ATP. Ligazele ADN T7 sunt, de asemenea, capabile să recoacă hibrizii ADN și ARN, dând naștere la conformații anormale în timpul transcrierii; cu toate acestea, acest fenomen este încă în curs de cercetare prin studii in vitro.
Care sunt asemănările dintre ADN ligaza T4 și T7?
- ADN Ligaza T4 și T7 participă la o reacție de ligare prin recoacerea duplexurilor ADN prin formarea de legături fosfodiesterice între capătul 3 'OH și capătul 5' fosfat al fragmentului de ADN.
- Ambele enzime ligează duplexuri ADN cu capăt contondent, care se află în imediata apropiere una de cealaltă.
- Ambele enzime sunt dependente de ATP.
- Aceste enzime sunt izolate prin infectarea celulelor E. coli cu bacteriofagul particular.
-
Aplicațiile ambelor enzime includ:
- Clonarea moleculară - pentru a lega gena de interes la vector
- Repararea ADN - pentru a repara nișele dublu catenare
- Replicarea ADN in vitro
- Reacția în lanț a ligazei
Care este diferența dintre ADN ligaza T4 și T7?
Difuzarea articolului din mijloc înainte de tabel
T4 vs T7 ADN ligază |
|
| T4 ADN ligază tip de ADN ligază izolată de bacteriofagul T4 și este implicată în ligarea fragmentelor de ADN adiacente prin formarea de legături fosfodiesterice. | T7 ADN Ligază tip de ADN ligază izolat de bacteriofagul T7 și este implicat în ligarea fragmentelor de ADN adiacente prin formarea de legături fosfodiesterice. |
| Mărimea proteinei | |
| Dimensiunea ADN ligazei T4 este de 77 kDa - mai mare comparativ cu ADN ligaza T7. | Mărimea ADN ligazei T7 este de 41 kDa. |
| PH optim | |
| Intervalul de pH care funcționează T4 ADN ligaza este de 7,5 - 8,0. | Intervalul de pH care funcționează ADN ligaza T7 este de 7,0 - 7,2. |
Rezumat - ADN ligază T4 vs T7
Ligazele ADN sunt o clasă importantă de enzime implicate în clonarea moleculară pentru a produce molecule de ADN recombinant care conțin gena de interes. Reacția de ligare este o reacție care utilizează energia și există noi studii de cercetare în curs de desfășurare pentru a îmbunătăți precizia prin modularea ligazelor disponibile. Ligazele ADN T4 și T7 sunt două tipuri de enzime importante ale ADN ligazei utilizate în tehnicile biologice moleculare. ADN ligaza T7 este, de asemenea, un rezultat al cercetărilor care s-au bazat pe ligaza primară izolată din E. coli infectată cu T4. T7 are o eficiență și o precizie mai mare în îndeplinirea funcției sale, datorită dimensiunilor sale mai mici. Aceasta este diferența dintre ligaza T4 și T7.
Descărcați versiunea PDF a Ligazei T4 vs T7 ADN
Puteți descărca versiunea PDF a acestui articol și o puteți folosi în scopuri offline conform notelor de citare. Vă rugăm să descărcați versiunea PDF aici Diferența dintre T4 și T7 Ligază.
