Diferența cheie - Phusion vs Taq Polymerase
ADN-polimerazele sunt enzime utilizate pe scară largă în tehnicile de biologie moleculară și sunt, de asemenea, prezente în mod natural în toate organismele care suferă replicarea ADN-ului. Acestea sunt enzimele cheie de polimerizare care implică în timpul replicării. ADN polimeraza este capabilă să adauge nucleotide la capătul 3 'liber al catenei ADN, provocând astfel extinderea unei noi catene. În prezent, datorită dezvoltării biologiei moleculare în diagnosticarea bolilor și aplicații industriale, este important să se fabrice polimeraze cu diferite proprietăți benefice. Acest lucru mărește precizia metodei și o face o tehnică mai rapidă. Phusion și Taq polimeraza sunt două enzime polimerază termostabilă produse în comerț, care sunt utilizate în aplicații moleculare speciale. Fuziunea este o ADN polimerază izolată din Pyrococcus furiosus și este utilizată în principal în experimentele de clonare pentru a crește fidelitatea. ADN polimeraza Taq este ADN polimeraza standard utilizată în reacția în lanț a polimerazei (PCR) și este izolată de bacteria termostabilă; Thermus aquaticus. Diferența cheie dintre cele două enzime este microorganismul sursă. Fuziunea este izolată de extremofilul, Pyrococcus furiosus, în timp ce polimeraza Taq este izolată de termofilul, Thermus aquaticus. Taq polimeraza este izolată de termofil, Thermus aquaticus. Taq polimeraza este izolată de termofil, Thermus aquaticus.
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferența cheie
2. Ce este Phusion
3. Ce este Taq Polymerase
4. Asemănări între Phusion și Taq Polymerase
5. Comparație Side by Side - Phusion vs Taq Polymerase în formă tabelară
6. Rezumat
Ce este Phusion?
ADN polimeraza Phusion este o polimerază nouă, care este fabricată prin izolarea enzimei din Pyrococcus furiosus, care este o arhea extremofilă. Acești microbi locuiesc în condiții de temperatură extrem de ridicată, făcând astfel polimeraza o polimerază foarte stabilă la căldură. Fusion polimeraza este utilizată pentru a obține o fidelitate extremă față de polimeraza termostabilă convențională; Taq polimeraza. Fusion polimeraza este capabilă să amplifice șabloane lungi de până la 7,5 kb de ADN genomic. Capacitatea optimă de polimerizare a polimerazei Phusion este de 72 0 C. Phusion este, de asemenea, utilizat în produsele de clonare pentru secvențierea, analiza expresiei și analiza mutației.
ADN polimeraza fuzionată are activitatea de exonuclează 3 '- 5'. Acest lucru permite corectarea firului nou sintetizat după sinteză. Prin urmare, nepotrivirile nucleotidice sunt ușor de reparat. Astfel, are o rată de eroare mai mică. Avantajele generale ale polimerazei Phusion sunt;
- Fidelitate extremă
- Viteză mare și timp de extensie redus
- Reacții robuste și necesită optimizare minimă
- Randament ridicat
Figura 01: Fuziune
Principalul dezavantaj al polimerazei Phusion este că este inhibat în prezența trifosfatului de deoxiuridină (dUTP). Când dUTP-urile sunt acumulate în amestecul de reacție, acesta poate inhiba acțiunile Phusion polimerazei. Acest lucru este prevenit prin tratarea amestecului de reacție cu dUTPază înainte de adăugarea enzimei. În prezent, o variantă rezistentă la DUTP a polimerazei Phusion cunoscută sub numele de Pfu Turbo este utilizată în locul polimerazei Phusion ca remediu pentru această problemă.
Ce este Taq Polymerase?
Invenția Taq ADN polimerază a revoluționat domeniul biologiei moleculare. A rezolvat o problemă majoră în amplificarea ADN-ului. Taq ADN polimeraza este o enzimă polimerazică stabilă la căldură extrasă și izolată din bacteria termofilă, Thermus aquaticus. Descoperirea acestor enzime duce la dezvoltarea PCR. Această enzimă a permis utilizarea reacției în lanț a polimerazei în amplificarea ADN în loc de tehnici convenționale de clonare laborioase. PCR este acum utilizat în diagnosticarea moleculară, în domeniile agricol și industrial, cu multe noi variante adăugate tehnicii.
Figura 02: Polimeraza Taq
Taq ADN polimeraza funcționează la intervalul optim de temperatură între 72 0 C - 80 0 C. Taq ADN polimeraza necesită un co-factor; magneziu pentru funcția sa. Taq polimeraza nu are capacitatea de corectare de 3 '- 5', prin urmare, rata de eroare a ADN polimerazei Taq este ridicată în comparație cu tipuri mai noi de ADN polimeraze, cum ar fi Phusion polimeraza etc. Dar popularitatea Taq ADN polimerază rămâne la fel în lumea științei datorită comodității și flexibilității enzimei.
Care sunt asemănările dintre Phusion și Taq polimeraza?
- Atât enzimele Phusion cât și Taq polimeraza sunt enzime polimerizante care sunt capabile să adauge nucleotide la capătul liber 3 'al catenei ADN.
- Atât polimerazele Phusion, cât și Taq necesită o secvență de grund pentru a iniția polimerizarea.
- Atât polimerazele Phusion, cât și Taq sunt stabile la căldură.
- Atât polimerazele Phusion, cât și Taq sunt utilizate în mecanismele PCR pentru a amplifica ADN-ul.
- Când se adaugă polimeraza la amestecul de reacție, atât polimerazele Phusion, cât și Taq sunt adăugate ultimele pentru a asigura eficiența enzimei.
- Atât polimerazele Phusion, cât și Taq sunt sintetizate comercial în scopuri experimentale de biologie moleculară.
- Atât polimerazele Phusion, cât și Taq necesită un cofactor pentru a-și completa funcția.
Care este diferența dintre Phusion și Taq Polymerase?
Difuzarea articolului din mijloc înainte de tabel
Phusion vs Taq Polymerase |
|
| Fuziunea este o ADN polimerază izolată din Pyrococcus furiosus și este utilizată în principal în experimentele de clonare pentru a crește fidelitatea. | Taq ADN polimeraza este ADN polimeraza standard utilizată în reacția în lanț a polimerazei (PCR) și este izolată de bacteria termostabilă, Thermus aquaticus. |
| Organismul sursă | |
| Fuziunea este extrasă din arheele extremofile - Pyrococcus furiosus. | Aceste opere literare se întind de la perioada de colonizare până la decolonizare. |
| Abilitatea de a citi dovada | |
| Capacitatea de citire de 3 '- 5' este prezentă în Phusion. | Capacitatea de citire de 3 '- 5' este absentă în polimeraza Taq. |
| Fidelitate | |
| Înalta fidelitate este acolo cu Phusion. | Taq polimeraza prezintă o fidelitate scăzută. |
| Amplificare | |
| Fuziunea este capabilă să amplifice fragmente lungi de ADN. | Taq polimeraza este capabilă să amplifice fragmente de ADN mult mai scurte. |
| otrăvire dUTP | |
| Acțiunea de fuziune este inhibată de acumularea impară. | Taq polimeraza nu este inhibată de dUPT. |
Rezumat - Phusion vs Taq polimerază
Phusion și Taq ADN polimeraza sunt două polimeraze stabile la căldură care sunt utilizate în tehnicile PCR. Fuziunea este o polimerază izolată de extremofil, Pyrococcus furiosus, în timp ce Taq este izolat de bacteriile termostabile Thermus aquaticus. Descoperirea Taq ADN polimerază duce la invenția PCR. Phusion are multe avantaje față de Taq, ceea ce a făcut din Phusion o opțiune mai bună în producerea ADN-ului de înaltă fidelitate. Cu toate acestea, Taq polimeraza este încă utilizată ca enzimă polimerază standard în PCR. Aceasta este diferența dintre Phusion și Taq polimeraza.
