Diferența cheie - Ligare Blunt vs Sticky End
Endonucleazele de restricție sunt enzime specifice care taie ADN-ul dublu catenar (ADNd). Ele sunt, de asemenea, cunoscute sub numele de foarfece moleculare în biologia moleculară. Enzimele de restricție sunt capabile să recunoască secvențe scurte specifice ale dsDNA cunoscute sub numele de site-uri de recunoaștere și scindează legături fosfodiester și hidrogen pentru a deschide catene duble. Ca urmare a clivajului de către aceste enzime, fragmente de ADN sunt produse cu diferite tipuri de capete, cum ar fi capetele lipicioase și capetele contondente. ADN ligaza este o enzimă utilizată în biologia moleculară pentru a uni două fire adiacente de ADN prin formarea de noi legături. Etapa este cunoscută sub numele de ligatură și, în funcție de tipul ligaturii ADN, acestea pot fi denumite ligatură extremă contondentă și ligatură finală lipicioasă. Diferența esențială între ligarea capătului contondent și lipicios constă în faptul că ligatura capătului contondent apare între fragmente de ADN care conțin două capete contondente, în timp ce ligarea capătului lipicios are loc între depășiri de 5 'și 3'. Comparativ cu ligatura capătului contondent, ligatura capătului lipicios este mai eficientă și mai stabilă.
CUPRINS
1. Prezentare generală și diferența cheie
2. Ce este legarea la capătul contondent
3. Ce este legarea la capătul lipicios
4. Comparație alăturată - Legarea la capătul contondent vs lipicios
5. Rezumat
Ce este o legătură Blunt End?
Unele endonucleaze de restricție pot tăia ADN-ul la bazele opuse și pot produce fragmente de ADN extrem. Aceste enzime sunt cunoscute sub numele de tăietoare de capăt contondente; acestea se despart direct până la mijlocul sitului de restricție, fără a lăsa bazele singure drepte care se dovedesc. Capetele contondente sunt, de asemenea, cunoscute sub numele de capete care nu depășesc, deoarece nu au baze de 3 'și 5' care depășesc la capete. Ambele fire se termină de la perechile de baze în capete contondente. Enzimele obișnuite de tăiere a capului contondent sunt EcoRV HaeIII, AluI și SmaI.
Ligarea capătului contondent este implicată între două capete contondente. Nu este o ligatură a bazelor proeminente. Această ligatură este mai puțin eficientă decât ligatura finală lipicioasă. Cu toate acestea, în unele ocazii, ligarea capătului contondent devine mai avantajoasă decât ligarea capătului lipicios, mai ales atunci când se leagă produsele PCR. Produsele PCR sunt întotdeauna produse cu capete contondente. Ligarea capătului contondent nu necesită capete complementare în ADN pentru ligare.
Figura 01: Producția finală directă de către enzima Eco RV
Ce este o legătură de sfârșit?
Unele endonucleaze de restricție sunt capabile să taie ADNd-ul, lăsând la sfârșit o bucată de ADN monocatenar. Aceste capete sunt cunoscute sub numele de capete lipicioase sau deasupra. Ligarea capătului lipicios are loc între două fragmente de ADN care conțin corabii potrivite, deoarece capetele lipicioase sunt posedate cu baze nepereche și necesită baze complementare pentru a forma legături. Prin urmare, este necesar să se utilizeze aceeași enzimă de restricție pentru ambele surse de ADN pentru a produce fragmentele de ligare potrivite.
Ligarea capătului lipicios este mai eficientă și este deseori extrem de dorită în procesele de clonare. Există mai multe enzime de restricție care produc capete lipicioase. Sunt EcoRI, BamHI, HindIII etc.
Figura 02: Producție finală lipicioasă de către enzima Eco RI
Care este diferența dintre Blunt și Sticky End Ligation?
Difuzarea articolului din mijloc înainte de tabel
Blunt vs Sticky End Ligation |
|
| Ligarea capătului contondent apare între două fragmente de ADN capăt contondent. | Ligarea capătului lipicios apare între două fragmente de ADN potrivite cu capete lipicioase. |
| Enzime | |
| Frezele cu capăt contondent produc capete contondente. | Frezele de capăt lipicioase produc capete lipicioase sau coezive. |
| Cerința încheierii potrivirii | |
| Nu necesită fragmente potrivite sau baze complementare. | Necesită baze complementare la capete pentru a forma perechi de baze. |
| Eficienţă | |
| Este mai puțin eficient decât ligarea capătului lipicios | Este mai eficient decât ligarea capătului contondent. |
Rezumat - Ligare Blunt vs Sticky End
Endonucleazele de restricție sunt capabile să scindeze ADN-ul ADS și să producă fragmente de ADN cu capete diferite. Ei recunosc secvențe specifice și restricționează ADN-ul creând capete lipicioase și contondente. Capetele lipicioase au baze nepereche la capătul fragmentelor. Capetele contondente sunt create datorită unui decolteu drept și au perechi de baze la capete. Ligarea capătului lipicios necesită două piese complementare de ADN monocatenar. Ligarea capătului contondent apare între oricare două fragmente capăt contondente. Aceasta este diferența dintre ligatura contondentă și lipicioasă.
